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采用冷凍保藏法保存微生物菌種時需注意幾點

更新時間:2019-06-21 點擊次數(shù):3227

冷凍保藏法適用于抗凍力強(qiáng)的微生物。這些微生物可在其菌體細(xì)胞外遭受凍結(jié)的情況下而不受損傷,而對其它大多數(shù)微生物而言,無論在細(xì)胞外凍結(jié)還是在細(xì)胞內(nèi)凍結(jié),都會對菌體造成損傷,當(dāng)采用這種保藏方法時,應(yīng)注意以下幾點:
1、原則上應(yīng)盡快進(jìn)行冷凍處理,但當(dāng)加入保護(hù)劑時,可靜置一段時間后再進(jìn)行處理。
2、就動物細(xì)胞而言,應(yīng)在-20℃范圍內(nèi)以1℃/min左右的速度緩慢降溫,此后必須盡快降到貯藏溫度;而對絕大多數(shù)微生物而言,則不必如此,如結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜的原蟲則可在-35℃范圍內(nèi)進(jìn)行緩慢降溫,而噬菌體則必需采用上述的二階段法進(jìn)行冷凍。
3、要選擇適于冷凍干燥的菌齡細(xì)胞。
4、要選擇適宜的培養(yǎng)基,因為某些微生物對冷凍的抵抗力,常隨培養(yǎng)基成分的變化而顯示出巨大差異。
5、要選擇合適的菌液濃度,通常菌液濃度越高,生存率越高,保存期也越長。
6、若進(jìn)行長期保存,則貯藏溫度越低越好。
7、取用冷凍保存的菌種時,應(yīng)采取速融措施,即在35~40℃溫水中輕輕振蕩使之迅速融解。而就厭氧菌來說,則應(yīng)選擇靜置融化的措施。當(dāng)冷凍菌融化后,應(yīng)盡量避免再次冷凍,否則菌體的存活率將顯著下降。
8、菌液內(nèi)不添加電解質(zhì)(如食鹽等)。
9、可在菌液內(nèi)添加甘油等保護(hù)劑,以防止在冷凍過程中出現(xiàn)菌體大量死亡的現(xiàn)象。同樣,也可添加各種糖類、去纖維血液和脫脂牛乳等具有良好保護(hù)效果的溶劑,但對有些微生物而言,不加保護(hù)劑時更有效。

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