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紫外分光光度法在測(cè)定蛋白質(zhì)含量時(shí)的實(shí)驗(yàn)原理

更新時(shí)間:2022-02-21 點(diǎn)擊次數(shù):2485

由于蛋白質(zhì)分子中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵,因此蛋白質(zhì)具有吸收紫外線的性質(zhì),吸收高峰在280nm波長(zhǎng)處。在此波長(zhǎng)范圍內(nèi),蛋白質(zhì)溶液的光吸收值(OD280)與其含量呈正比關(guān)系,可用作定量測(cè)定。


利用紫外吸收法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的優(yōu)點(diǎn)是民迅速、簡(jiǎn)便、不消耗樣品,低濃度鹽類不干擾測(cè)定。因此,在蛋白質(zhì)和酶的生化制備中(特別是在柱層析分離中)得到廣泛應(yīng)用。


此法的缺點(diǎn)是:(1)對(duì)于測(cè)定那些與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)酪氨酸和色氨酸含量差異較大的蛋白質(zhì),有一定的誤差;(2)若樣品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外線的物質(zhì),會(huì)出現(xiàn)較大的干擾。根據(jù)蛋白質(zhì)和核酸的吸收高峰不同,并利用這一性質(zhì),通過計(jì)算可以適當(dāng)校正核酸的干擾作用。




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